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色谱定量分析中定量方法的选择
2020.03.17   点击109次

色谱及质谱检测中往往需要对目标物质进行定量,目前使用较多的定量方法有面积归一化法、单点校正法、外标法、内标法、标准加入法等。

定量分析基本要求:

1、纯物质做标准

2、被定量组分峰要与其它峰达到基线分离(质谱可不满足)

3、符合定性参数要求

4、选择合适的定量方法

一、面积归一化法

山西福彩网把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法,称为归一化法。当样品中所有组分均能流出色谱柱,—并在检测器上都能产生信号的样品,可用归一化法定量。

各成分校正因子一致时可用该法,该法简便、准确,特别是进样量不容易准确控制时,进样浓度及进样量的变化的影响很小。

其他操作条件,如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。气相色谱应用广于高效液相色谱。

归一化法优缺点

优点:简便、准确、当操作条件如进样量、流速等变化时,对结果影响小。

缺点:

① 不能做到都出峰

② 峰间有重叠

③ 难以测出f(校正因子)

适用:

测量产物及副产物都清楚的混合物含量测定

二、内标法

选择适宜的物质作为欲测组分的参比物,定量加到样品中去,依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值(峰面积或峰高)之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。内标法是一种间接或相对的校准方法。

采用内标法定量时,内标物的选择是一项十分重要的工作。内标物应是原样品中不存在的纯物质,该物质的性质应尽可能与欲测组分相近,不与被测样品起化学反应,同时要能完全溶于被测样品中。内标物的峰应尽可能接近欲测组分的峰,或位于几个欲测组分的峰中间,但必须与样品中的所有峰不重叠,即完全分开。一般会选择标准物质的同位素物质作为内标物。

影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。

由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。

化学方面的因素包括:

1、内标物在样品里混合不好;

2、内标物和样品组分之间发生反应;

3、内标物纯度可变等。

对于一个比较成熟的方法来说,色谱方面的问题发生的可能性更大一些,色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大,对面积比的影响则要小一些,但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度,那么一定有某个重要的色谱问题存在,比如进样量改变太大,样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别,检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变,这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。

如果认为方法比较可靠,而色谱固看来也是正常的话,应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是:面积比可变,而峰高比保持相对恒定。

优点:进样量的变化,色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响不大,特别是在样品前处理(如浓缩、萃取,衍生化等)前加入内标物,然后再进行前处理时,可部分补偿欲测组分在样品前处理时的损失。若要获得很高精度的结果时,可以加入数种内标物,以提高定量分析的精度。

缺点:选择合适的内标物比较困难,内标物的称量要准确,操作较麻烦。不适用于快速分析。

三、外标法

山西福彩网用待测组分的纯品作对照物质,以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。

在完全相同的条件下,准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液,根据待测组分的信号,从标准曲线上查出其浓度,或用回归方程计算,工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零时,可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标法的优缺点:

优点:不需所有峰都被流出或被检测到;只对所测组分作校正;可以校正检测器的非线性响应。

缺点:进样量必须准确;仪器必须有良好的稳定性。

四、标准加入法

标准加入法可以看作是内标法和外标法的结合。当选择不到合适的内标物或无空白样品时,以待测组分的纯物质为内标物加入到待测样品中,然后在相同的色谱条件下,测定加入待测组分纯物质前后的峰面积(或峰高),从而计算待测组分在样品中含量的方法。

具体操作是取等量待测样品若干份,加入不同浓度的待测组分的标准溶液进行分析,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制工作曲线。工作曲线延长线在横坐标上的截距即为样品中待测组分的浓度。由于待测组分以及加入的标准溶液处在相同的样品基体中,相当于把待测试样作为了背景值。

但是,由于对每一个样品都要配制三个以上的、含样品溶液和标准溶液的混合溶液,因此,这种方法不适于大批样品的分析。

标准加入法的优缺点。

优点:不需要另外的标准物质作内标物,只需欲测组分的纯物质,进样量不必十分准确,操作简单。若在样品的前处理之前就加入已知准确量的欲测组分,则可以完全补偿欲测组分在前处理过程中的损失,是色谱分析中较常用的定量分析方法。

缺点:要求加入欲测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同,以保证两次测定时的校正因子完全相等,否则将引起分析测定的误差。

五、单点校正法

当被测试样中各组分浓度变化范围不大时,可不必绘制多点标准曲线,而采用单点校正法(直接比较法)。配制一个和被测组分含量接近的标准溶液,定量进样,依据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分的含量。其缺点是当方法存在系统误差时(即标准工作曲线不通过原点),单点校正法的误差比之标准曲线法要大得多。

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